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標(biāo)題:反轉(zhuǎn)錄和逆轉(zhuǎn)錄的區(qū)別一、反轉(zhuǎn)錄(ReverseTranscription)1.定義:以RNA為模板合成DNA的過程,逆轉(zhuǎn)中心法則方向(RNA→DNA)。2.核心要素:3.催化酶:反轉(zhuǎn)錄酶(ReverseTranscriptase,RTase)4.常見來源:逆轉(zhuǎn)錄病毒(如HIV)、嗜肝DNA病毒、端粒酶5.反應(yīng)本質(zhì):RNA指導(dǎo)的DNA合成6.分子生物學(xué)實驗:RT-PCR:提取RNA→反轉(zhuǎn)錄為cDNA→PCR擴增目標(biāo)基因cDNA文庫構(gòu)建:將mRNA逆轉(zhuǎn)錄為雙鏈DNA并克隆7...
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標(biāo)題:T細(xì)胞激活磁珠指南:高效擴增/免疫治療核心工具|技術(shù)解析+選型攻略一、T細(xì)胞激活磁珠:免疫細(xì)胞治療革命的“發(fā)動機”在CAR-T療法、腫瘤免疫治療、疫苗開發(fā)等領(lǐng)域,T細(xì)胞的高效激活與擴增是成功的關(guān)鍵。傳統(tǒng)抗體刺激法存在激活效率低、細(xì)胞因子風(fēng)暴風(fēng)險高、操作繁瑣等痛點。解決方案:T細(xì)胞激活磁珠——通過超順磁性微球偶聯(lián)CD3/CD28抗體,模擬體內(nèi)抗原遞呈,實現(xiàn):95%T細(xì)胞活化率(遠(yuǎn)超板包被法)擴增倍數(shù)提升5-10倍精準(zhǔn)控制激活強度,降低細(xì)胞因子釋放綜合征(CRS)風(fēng)險二、核...
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質(zhì)粒提取濃度低?6大核心原因+解決方案+避坑指南的知識干貨,分享給每位同學(xué)~一、質(zhì)粒濃度低直接后果:實驗全線崩潰!當(dāng)質(zhì)粒濃度<50ng/μL時:1.轉(zhuǎn)化失敗率↑300%2.測序信號弱(峰圖碎裂)3.酶切/連接效率暴跌立即排查以下6大關(guān)鍵環(huán)節(jié)!二、質(zhì)粒濃度低的6大核心原因+破解方案原因1:菌體量不足(占比~35%)錯誤操作:?OD???<0.6收菌→菌數(shù)太少?離心轉(zhuǎn)速<6000g→菌體丟失解決方案:收菌標(biāo)準(zhǔn):OD???=0.8-1.0(對數(shù)生長期)離心參數(shù):≥12,000g×2...
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一、磁極在磁性細(xì)胞分選中的作用原理磁性細(xì)胞分選的核心步驟是:磁性標(biāo)記:目標(biāo)細(xì)胞通過與表面包被有特異性抗體(針對目標(biāo)細(xì)胞表面標(biāo)志物)的超順磁性微珠結(jié)合,從而被“磁化”。磁場分選:將標(biāo)記好的細(xì)胞懸液通過或置于細(xì)胞分選磁極產(chǎn)生的磁場區(qū)域。分離捕獲:在高梯度磁場的作用下,結(jié)合了磁性微珠的目標(biāo)細(xì)胞會被強大的磁力捕獲并滯留在磁極表面或磁極內(nèi)部的分離基質(zhì)(如填充了鐵絲的柱子)上。未標(biāo)記的非目標(biāo)細(xì)胞則不受磁場影響(或影響極小),隨液體流穿過磁極區(qū)域。洗脫收集:移除磁場后,被捕獲的目標(biāo)細(xì)胞失去...
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在生命科學(xué)研究和臨床診斷領(lǐng)域,精準(zhǔn)、高效地分離特定類型的細(xì)胞至關(guān)重要。磁性細(xì)胞分選技術(shù)(MagneticCellSorting,MACS)因其操作簡便、快速、溫和且分選純度高等優(yōu)點,已成為主流的細(xì)胞分離方法之一。而在這項技術(shù)的核心,扮演著“幕后功臣”角色的,正是細(xì)胞分選磁極。一、什么是細(xì)胞分選磁極?細(xì)胞分選磁極,簡稱為磁極或磁分離柱/架,是磁性細(xì)胞分選系統(tǒng)中產(chǎn)生高強度、高梯度磁場的關(guān)鍵物理部件。它通常由特殊的永磁體材料(如釹鐵硼)或電磁體構(gòu)成,并設(shè)計成特定的形狀(如圓柱形、方...
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